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Nalgene耗材主要特點(diǎn)：

• 堅(jiān)硬的樣品瓶支架可將樣品瓶與酒精隔開(kāi)，以防樣品被燈芯污染
• 僅需要 100% 異丙醇和一個(gè) -70°C 機(jī)械冷凍機(jī)
• 貼有按步驟的圖形說(shuō)明標(biāo)簽
• zui多可放置 18 個(gè)樣品瓶

 1、簡(jiǎn)單的裝置可實(shí)現(xiàn)每分鐘1℃的降溫，可大大的提高細(xì)胞的存活率

2、用之前在盒夾層內(nèi)裝入100%異丙醇

3、凍存1℃凍存容器，“梯度降溫盒”，聚碳酸酯；藍(lán)色高密度聚乙烯蓋；白色高密度聚乙烯管槽；泡沫襯墊

4、直徑×高度：120×86mm， 適用于1.0-2.0ml凍存管

Nalgene耗材使用時(shí)注意事項(xiàng)：

細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，zui后再放置到液氮槽中長(zhǎng)期保存。程序降溫盒的使用注意事項(xiàng)如下：

經(jīng)驗(yàn)1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線。4 a. C* D8 Y& P9 A, y

凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進(jìn)去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊。）

根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過(guò)一段時(shí)間后是要更換的，但是我一直沒(méi)換過(guò)，也沒(méi)發(fā)現(xiàn)很大問(wèn)題。

經(jīng)驗(yàn)2：我們實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來(lái)用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯(cuò)的。

經(jīng)驗(yàn)3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請(qǐng)注意清理!

經(jīng)驗(yàn)4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來(lái)的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線，否則降溫效果會(huì)受到影響。

經(jīng)驗(yàn)5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對(duì)環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時(shí)候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對(duì)細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時(shí)候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存。過(guò)夜再轉(zhuǎn)入液氮。

程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。